J. Bras. Nefrol. 2004;26(3 suppl. 2):15-7.
ORAL – Transplante
Transplante
AO-037
REDUZIDO NUMERO DE CÉLULAS NKT Vα24+ Vβ11+ NO SANGUE PERIFÉRICO DE RECEPTORES DE TRANSPLANTE RENAL COM LONGO TEMPO DE SOBREVIDA DO ENXERTO LIVRE DE REJEIÇAO AGUDA
GALANTE, N. Z.; CAMARA, N. O. S.; KALLAS, É. G.; CENEDEZE, M. A.; SALOMAO, R.; SILVA, A. P.
LABORATORIO DE IMUNOLOGIA CLINICA E EXPERIMENTAL – HOSPITAL DO RIM E HIPERTENSAO – DISCIPLINA DE NEFROLOGIA.
Introduçao: Recentes observaçoes têm confirmado a participaçao das células NKT na regulaçao de diversas doenças autoimunes humanas tais como o Diabetes Tipo 1 e a Esclerose Múltipla. Modelos experimentais mostram que as células NKT participam também da regulaçao da alloresposta. Nao há informaçoes entretanto, quanto a possível contribuiçao no transplante de órgao sólidos humanos. Método: Células NKT TCR Vα24+ Vβ11+ foram identificadas e fenotipadas no sangue periférico de acordo com a expressao de CD4 e CD8 por citometria de fluxo em 7 controles normais (CN), em 12 receptores de rins de cadáver mantidos com imunossupressao mínima com mais de 10 anos de seguimento sem episódios de rejeiçao (Longo Prazo nao RA – LNRA), em 11 pacientes com rejeiçao aguda (RA), e em 8 pacientes com disfunçao aguda do enxerto nao atribuída a RA (NRA). Os resultados foram expressos como porcentagens de células NKT Vα24+ Vβ11+ CD4+ CD8- (NKT CD4+) ou CD4- CD8- (NKT – duplo negativas DN) na populaçao de células CD3+. Resultados: As porcentagens de células NKT Vα24+ Vβ11+ foram 0,08, 0,14, 0,02 e 0,09% da populaçao de linfócitos respectivamente dos grupos RA, NRA, LNRA e CN (LNRA vs. NRA, p<0,05; LNRA vs. CN e RA, p=0,05, ANOVA). Células NKT CD4+ corresponderam a 26,04, 25, 13,54 e 17,24% e NKT DN a 27,7, 25,84, 7,29 e 48,57% das células NKT Vα24+ Vβ11+, respectivamente nos mesmos grupos. A diferença entre as freqüências de NKT CD4+ e NKT DN nao foram estatisticamente significantes. Conclusoes: Este estudo mostrou que pacientes LNRA têm reduzido número de células NKT no sangue periférico e que a freqüência do fenótipo NKT CD4+ (eficientes produtoras de IL-4) supera a do NKT DN. Esses achados indicam que um padrao distinto de distribuiçao das células NKT no sangue periférico está presente nos pacientes LNRA. Estudos funcionais incluindo a identificaçao e caracterizaçao funcional desta populaçao celular tanto na periferia quanto no enxerto sao pontos críticos para o estabelecimento do papel da célula NKT na regulaçao da alloresposta ao transplante renal humano.
AO-038
PARTICIPAÇAO DE MIOFIBROBLASTOS E MASTOCITOS NA REJEIÇAO AO ENXERTO DE PACIENTES SUBMETIDOS A TRANSPLANTE DE PANCREAS-RIM
OLIVEIRA, S. G.; NORONHA, I. L.; TAVARES, T. S.; MARTINI FILHO, D.; MIRANDA, M. P.; GENZINI, T.; ROMAO JUNIOR, J. E.; ABENSUR, H.
LABORATORIO DE FISIOPATOLOGIA RENAL DA FACULDADE DE MEDICINA DA USP.
CLINICA DE NEFROLOGIA E HEPATO DO HOSPITAL BENEFICENCIA PORTUGUESA DE SAO PAULO.
HOSPITAL ISRAELITA ALBERT EINSTEIN SAO PAULO.
Introduçao: A DIFERENCIAÇAO DE FIBROBLASTO EM MIOFIBROBLASTO é um evento inicial e crucial no processo de fibrose tecidual. Os miofibroblastos sao considerados as principais células produtoras de componentes da matriz extracelular. Recentemente, existem evidências de que os mastócitos também participam do processo inflamatório crônico e do desenvolvimento da fibrose, pois além de sintetizarem substâncias vasoativas sao células produtoras de mediadores inflamatórios, fatores de crescimento (TGF-b), proteoglicanos e colágeno. O objetivo do presente estudo foi o de identificar miofibroblastos e mastócitos em biópsias de rejeiçao ao enxerto renal e pancreático, em pacientes submetidos a transplante de pâncreas-rim simultâneo (TPRS). Métodos: Participaram deste estudo 70 pacientes que realizaram 66 biópsias, as quais foram classificadas em 3 grupos: rejeiçao aguda (RA), rejeiçao crônica (RC) e biópsias sem evidências de rejeiçao (Sem Rej). Através da técnica de imuno-histoquímica os miofibroblastos foram identificados pela expressao de a-actina do músculo-liso e os mastócitos foram identificados utilizando-se o anticorpo antiquimase. Resultados: média † EPM; = p < 0,05 vs Sem Rej; # p < 0,05 vs RA.
Conclusao: O aumento significativo do número de miofibroblastos e mastócitos nos casos de rejeiçao crônica sugere que estas células possam ter um importante papel no processo inflamatório crônico tanto no enxerto renal como no enxerto pancreático.
AO-039
CORRELAÇAO ENTRE O ESTADO INFLAMATATORIO PRÉ-TRANSPLANTE E PRESENÇA DE REJEIÇAO AGUDA POS-TRANSPLANTE RENAL
OZAKI, K. S. ; GALANTE, N. Z.; DALBONI, M. A.; CAMARA, N. O. S.; CENDOROGLO, M.; SILVA, A. P.
DISCIPLINA DE NEFROLOGIA, ESCOLA PAULISTA DE MEDICINA, SAO PAULO – SP.
Introduçao: Há relatos de que o estado inflamatório pré-transplante correlacionase com maior incidência de rejeiçao aguda (RA) após o transplante renal. Dados sugerem que os níveis séricos de citocinas Th1 se correlacionariam com episódios de rejeiçao aguda. Objetivo: Na tentativa de identificar receptores de transplante renal com status inflamatório pré-transplante com maior propensao de rejeiçao aguda. Materiais e Métodos: Foram incluídos 135 receptores consecutivos de transplante renal, sem distinçao de sexo, idade ou fonte do doador (vivo ou cadáver), no período de 10/2001 a 02/2002. Proteína C Reativa (PCR), IL-10, TNF-α e Fas-L solúvel foram dosados no soro dos pacientes utilizando a técnica de ELISA (pg/mL) e imunonefelometria. Os valores de referências (VR) foram obtidos num grupo controle (GC) de pessoas higídas, e para PCR, VR: 0,5mg/dL. Resultados: A idade média foi de 37,7 ± 14,6 anos, sendo 65% do sexo masculino e 31,1% receptores de rim de cadáveres. Os valores medianos de IL-10, TNFa e Fas-L solúvel foram significativamente inferiores no grupo GC (7,2, 4,0 e 1084,6, respectivamente) quando comparados com o s receptores renais (22,5, 13,5 e 3049,4, respectivamente). Vinte e nove (21,4%) pacientes apresentaram rejeiçao aguda pós-transplante, apresentando níveis de menores de IL-10 sérica (3.5 vs 7.0). Entretanto nao houve correlaçao entre os níveis dos outros fatores e a presença ou ausência de rejeiçao aguda. Conclusao: Pacientes transplantados renais apresentam um perfil pró-inflamatório pré-transplante, e os níveis de IL-10 séricos podem auxiliar no manuseio pós-transplante. Dados adicionais sobre polimorfismo gênicos das citocinas podem ser relevantes para determinar uma relaçao causal entre o status inflamatório e os episódios imunes pós-transplante.
AO-040
A REVERSAO DA DISFUNÇAO RENAL APOS A REJEIÇAO AGUDA É O PRINCIPAL FATOR PROGNOSTICO DE SOBREVIDA DO ENXERTO EM TRANSPLANTE RENAL
BARBOSA, D. C. M. ;CAMARA, N. O. S. ; GALANTE, N. Z.; OZAKI, K. S.; SILVA, A. P.
LABORATORIO DE IMUNOLOGIA CLINICA E EXPERIMENTAL. HOSPITAL DO RIM E HIPERTENSAO. DISCIPLINA DE NEFROLOGIA – UNIVERSIDADE FEDERAL DE SAO PAULO.
Introduçao: A incorporaçao de modernos agentes imunossupressores na prática clínica contemporânea foi associada à efetiva reduçao na incidência e na intensidade dos episódios de rejeiçao aguda (RA) no primeiro ano após o transplante. Entretanto, as estimativas de sobrevida a longo prazo do enxerto renal nao têm se modificado proporcionalmente. Objetivo: Avaliar o impacto da disfunçao renal após a rejeiçao aguda na sobrevida do enxerto. Material e Método: Foram estudados 439 receptores de rins de cadáver com idade média de 37,6 anos sendo 55% do sexo masculino. O esquema imunossupressor incluía, ciclosporina em 240 pacientes, tacrolimus em 197 e livre de inibidor de calcineurina em 23 pacientes. Todos os pacientes receberam corticosteróides e azatioprina ou mofetil micofenolato. Anticorpos anti-linfocíticos foram também prescritos de acordo com protocolos da instituiçao. Os pacientes foram divididos de acordo com presença de RA e sua repercussao na funçao renal, calculada como sendo a variaçao porcentual no valor da creatinina sérica medida 6 meses após a RA. O valor da creatinina estável imediatamente antes da RA foi utilizado como referência. Os pacientes foram divididos em 4 grupos: sem RA (grupo 1), com RA, porém com recuperaçao completa da funçao renal (grupo 2), com RA, porém com até 30% de acréscimo no valor da creatinina (grupo 3) e com RA, porém com mais de 70% de acréscimo no valor da creatinina (grupo 4). O método utilizado para o cálculo das curvas de sobrevida foi o de Kaplan-Meier com as comparaçoes entre os grupos feitas pelo teste de Log-Rank. Resultados: A incidência de RA foi de 24,5, 13,19 e 43,4% respectivamente entre os pacientes imunossuprimidos com ciclosporina, tacrolimus e esquema livre de inibidor de calcineurina. De acordo com a presença e/ou recuperaçao da funçao renal as sobrevidas do enxerto ao final de 3,5 anos foram de 83, 72 e 54% respectivamente entre receptores do grupo 1, grupo 2 e RA sem recuperaçao da funçao renal (grupos 3 e 4 agrupados) (p=0,001). Episódios de RA severas (grupo 4) pioraram significativamente a sobrevida do enxerto quando comparados com episódios cuja repercussao na funçao renal após o tratamento foi mínima ou inexistente (grupo 2), 20 vs. 71%, p=0,02. Decréscimos de moderada intensidade na funçao renal após a RA (grupo 3) também foram associados a pior sobrevida do enxerto em 3,5 anos embora a diferença observa nao tenha sido estatisticamente significante na comparaçao com a sobrevida obtida no grupo com RA e recuperaçao da funçao renal (grupo 2) (57 vs. 71%, p=0,53). Conclusoes: O impacto da rejeiçao na funçao renal após 6 meses é fator preditivo da evoluçao do enxerto a longo prazo.
AO-041
AUMENTO DA DETECÇAO DE ALOANTICORPOS ANTI-HLA CLASSE I NO PRÉ TRANSPLANTE RENAL ATRAVÉS DA REATIVIDADE CONTRA PAINEL USANDO CITOMETRIA DE FLUXO
FERNANDES, S. R. ;SAITOVITCH, D. RODRIGUES, H.; ZANENGA, D.; FAGUNDES, I.; KEITEL, E.; GARCIA, V.; NEUMANN, J.
SANTA CASA DE PORTO ALEGRE E PONTIFICIA UNIVERSIDADE CATOLICA DO RIO GRANDE DO SUL
Introduçao: O objetivo deste estudo visa determinar a incidência de aloanticorpos anti-HLA classe I nao específicos contra o doador no pré-transplante renal através da comparaçao dos métodos de realizaçao da reatividade contra painel (PRA). Métodos: Estudamos retrospectivamente 267 transplantados renais adultos com doador cadáver entre o período de 1998 e 2002 na Santa Casa de Porto Alegre. Todos os pacientes foram transplantados com prova cruzada CDC-AGH negativa. O soro dos receptores com PRA negativo por CDC-AGH ou Elisa foram retestados usando citometria de fluxo (Flow), considerando positividade resultados > 10%. Foram excluídos da análise 5 receptores por indisponibilidade de soro para reteste. Resultados: Dos 262 pacientes estudados 35 (13,4%) apresentaram PRA positivo por Elisa. PRA negativo foi observado em 227 receptores (86,6%), sendo 18 por CDC-AGH e 209 por Elisa. Destes, 32 (14,1%) foram positivos quando retestados por Flow, sendo 4 dos 18 CDC-AGH e 28 dos 209 Elisa. Entre eles, 10/32 apresentaram PRA > 50% (2 CDC-AGH e 8 Elisa negativos), representando 11,1% (2/18) e 3,8% (8/209) de hipersensibilizados nao detectados por CDC-AGH e por Elisa, respectivamente. Comparadas ao Flow, a sensibilidade e a especificidade da PRA Elisa foi de 55,6% e 99,4%, respectivamente. Conclusao: A utilizaçao do PRA-Flow permitiu detectar um adicional de 12% de pacientes sensibilizados e de 4% de hipersensibilizados nao diagnosticados pelos outros métodos
AO-042
TRANSPLANTE RENAL USANDO DOADORES VIVOS COM PROVACRUZADA POSITIVA: PODEMOS PREDIZER A EFICACIA DA DESENSIBILIZAÇAO POR UM TESTE “IN VITRO” COM IMUNOGLOBULINAS POLIVALENTES (IVIG)?
CASTRO, M. C. R.1; PANAJOTOPOULOS N.2; ARAUJO, L. M. P.1; RODRIGUES, H.2; MACIEL, R.1; RONDA, C.2; VIGGIANI, C. S.2; NAHAS, W. C.1; DAVID-NETO, E.1; IANHEZ, L. E.1; KALIL FILHO, J.2; GLOTZ, D.2,3
1. UNIDADE DE TRANSPLANTE RENAL.
2. LABORATORIO DE IMUNOLOGIA (INSTITUTO DO CORAÇAO), UNIVERSIDADE DE SAO PAULO, SAO PAULO, BRASIL.
3. UNIDADE DE TRANSPLANTE RENAL – HOSPITAL EUROPEU GEORGE POMPIDOU, PARIS, FRANÇA.
A administraçao de altas doses de IVIg tem se provado eficaz na reduçao dos títulos de anticorpos anti-HLA na maioria dos pacientes. A taxa de sucesso varia de 50 a 87% dos pacientes tratados, e devido ao custo do tratamento, seria importante encontrar um teste “in vitro” que pudesse predizer a resposta clínica dos pacientes à imunoglobulina. Tem sido proposto que a inibiçao da prova-cruzada por citotoxicidade por uma dose fixa de IVIg poderia predizer a subseqüente resposta clínica a IVIg. Iniciamos um protocolo de desimunizaçao de pacientes com provacruzada positiva contra um potencial doador vivo. Cinco pacientes foram tratados até o momento, com 3 pulsos mensais de 2 g/Kg de IVIg (Endobulin), com negativaçao da prova-cruzada em 4 casos (o quinto caso está ainda sob tratamento). Em todos os cinco casos, a adiçao de IVIg (25 mg/ml) ao soro dos pacientes nao teve nenhum efeito no resultado da prova-cruzada (Tabela I), enquanto que a administraçao de IVIg aos pacientes foi bem sucedida em todos os casos. Pacientes receberam os transplantes sob um regime de imunossupressao que incluiu Timoglobulina, Cellcept, Tacrolimus e corticosteróide, com pulsos adicionais de IVIg nos dias -1/0, 20/21 e 42/43 pós-transplante. Uma rejeiçao responsiva a esteróides (Banff 1a) foi diagnosticada e um enxerto foi perdido por rejeiçao vascular.
Concluímos que até o momento, nao há um teste “in vitro” que possa contraindicar o tratamento com IVIg, particularmente naqueles pacientes com um potencial doador vivo.
AO-043
EXPRESSAO DE C4D E ANALISE DE APOPTOSE EM BIOPSIAS DE ENXERTO RENAL E PANCREATICO
OLIVEIRA, S. G.; NORONHA, I. L.; MALHEIROS, D. M. A. C.; PETTA, A. D.; MARTINI FILHO, D.; MIRANDA, M. P.; GENZINI, T.; ROMAO JUNIOR, J. E.; ABENSUR, H.
LABORATORIO DE FISIOPATOLOGIA RENAL DA FACULDADE DE MEDICINA DA USP.
CLINICA DE NEFROLOGIA E HEPATO DO HOSPITAL BENEFICENCIA PORTUGUESA DE SAO PAULO.
HOSPITAL ISRAELITA ALBERT EINSTEIN SAO PAULO.
Introduçao: Apesar do papel bem definido dos linfócitos T no processo de rejeiçao aguda e crônica, recentemente tem-se demonstrado, através da detecçao de C4d em biópsias, a participaçao de um componente humoral no processo de rejeiçao. Outro mecanismo envolvido na rejeiçao ao enxerto é a apoptose, um mecanismo que regula a morte celular. O objetivo do presente estudo foi o de car – acterizar a expressao de C4d e identificar a presença de células em apoptose no processo de rejeiçao em pacientes submetidos ao transplante de pâncreas-rim. Métodos: Foram analisadas 69 biópsias provenientes de 59 pacientes. As biópsias foram classificadas em 3 grupos: rejeiçao aguda (RA), rejeiçao crônica (RC) e biópsias sem evidências de rejeiçao (Sem Rej). Tecidos renal e pancreático normais foram utilizados como controle (Normal). A expressao de C4d foi detectada por imunoperoxidase e as células apoptóticas foram identificadas pela técnica do TUNEL . Resultados: média±EPM; * p < 0,05 vs Normal; † p < 0,05 vs SR; p < 0,05 vs RC.
A marcaçao para C4d em capilares foi observada em RA, tanto no enxerto renal como no enxerto pancreático e também em alguns casos de RC do pâncreas. Em biópsias de enxerto renal, as células apoptóticas foram detectadas no interstício e em túbulos. Em biópsias pancreáticas, a marcaçao do TUNEL foi observada em células intersticiais e raramente em ilhotas pancreáticas. Conclusao: A detecçao de C4d tanto nos casos de RA renal como na rejeiçao pancreática indica a participaçao de um mecanismo humoral no TPRS. Embora a apoptose possa refletir um mecanismo de modulaçao da resposta imune, através da eliminaçao de células inflamatórias, a apoptose de células do próprio enxerto pode resultar em dano do órgao, particularmente no enxerto pancreático.
AO-044
EXPRESSAO AUMENTADA DE MRNA DE MOLÉCULAS CITOTOXICAS EM CÉLULAS URINARIA EM NEFROPATIA CRONICA EM RECEPTORES DE ALOENXERTO RENAL
RENESTO, G. ; CAMARA, N. O. S.; CENEDEZE, M.; SILVA, A. P.
LABORATORIO DE IMUNOLOGIA CLINICA E EXPERIMENTAL, DISCIPLINA DE NEFROLOGIA, HOSPITAL DO RIM E HIPERTENSAO, UNIVERSIDADE FEDERAL DE SAO PAULO, SAO PAULO, BRASIL.
Introduçao: A rejeiçao crônica é a principal complicaçao tardia do transplante de órgaos, sendo a causa mais importante de perda a longo prazo de enxertos vascularizados. O reconhecimento das células e dos mediadores envolvidos neste processo é importante para o esclarecimento dos mecanismos patogênicos e para o desenvolvimento de estratégias de controle desta resposta imune. A ativaçao de linfócitos T no desenvolvimento da nefropatia crônica do aloenxerto, tanto nas fases precoces contribuindo para a endotelite, como em fases tardias promovendo a produçao de fatores fibrogênicos têm sido investigadas. Objetivo: avaliar o perfil de mRNA de moléculas citotóxicas de linfócitos T em células urinárias de pacientes com nefropatia crônica do aloenxerto renal. Material e Método: Sessenta amostras de urina de 60 pacientes foram analisadas, sendo 30 pacientes com nefropatia crônica do enxerto (NPC) e 30 pacientes sem rejeiçao (SRA). Os níveis de mRNA de granzima-B, perforina, Fas-L e g-IFN. mRNA foram quantificados utilizando-se RT-PCR em tempo real Assays-bydesign/ MGB Primer específico e foram expressos em mRNA 2DDCT/GAPDH. Resultado: os níveis de mRNA de perforina, e FasL estavam discretamente ou diminuídos nos pacientes com NPC. Supreendentemente os níveis de granzima-B e γ-IFN estavam aumentados (2 a 2,5) em células urinárias de pacientes com nefropatia crônica do aloenxerto renal (NPC) comparado com aloenxertos sem rejeiçao aguda (SAR).
Conclusao: A presença destes marcadores em casos de nefropatia crônica evidencia a presença de um processo citotóxico em atividade, podendo contribuir em alguns casos para a reavaliaçao do nível e intensidade da terapia imunossupressora.
AO-045
INTERRUPÇAO DA PROGRESSAO DE NEFROPATIA CRONICA DO ENXERTO RENAL COM USO DE BLOQUEADOR DE RECEPTOR AT1 DE ANGIOTENSINA II
AGUIAR JUNIOR, M. C.; CRISTELLI, M.; RUTKOWSKI, C. P.; BAMBIRRA, E.; SALOMAO, A.
HOSPITAL DAS CLINICAS DA FACULDADE DE MEDICINA, UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS.
Introduçao: A Nefropatia Crônica do Enxerto (CAN) é causa frequente e irreversível de perda do rim transplantado após primeiro ano de transplante. Lesoes fibróticas sao as principais características histológicas. TGF-β1 é importante fator envolvido em fibrogênese. Ciclosporina e Angiotensina II (AngII) sao capazes de induzir a expressao de TGF-β1. Objetivo: Avaliar a possibilidade de interrupçao da evoluçao de CAN em transplantados renais com uso de bloqueador específico de receptor de AngII (AT1R). Métodos: 19 pacientes (14 homens), idade média 43±9 anos, tempo médio de transplante 7,5 ± 4,5 anos, 17 em esquema clássico de imunossupressao (CSA, AZA, PRED). Diagnóstico de CAN: Alteraçoes histológicas e nível persistente de creatinina sérica (Cr) >1,8mg/dL. Nefrotoxicidade por droga detectada em 8/19 pacientes. Todos usaram Losartan® 50 mg/dia; seguimento médio de 29 meses (m). Nao ocorreu suspensao da droga por efeito colateral. Rebiopsiados 13 pacientes pelo menos 12 meses depois. Imuno-histoquímica para estudo de expressao de AT1R e de TGF- β1 foi obtida em 3 pacientes. Resultados: Os pacientes permaneceram com funçao renal estável durante a observaçao ( Cr pré-Losartan®: 2,2±0,7 mg/dl; 6 m: 1,9±0,9 mg/dl; 17 m: 2,3±0,5 mg/dl ). Histologia demonstrou significativa reduçao das lesoes. Imuno-histoquímica revelou reduçao da expressao de AT1R e TGF-β1 em túbulos, glomérulos, vasos e interstício. Conclusoes: Demonstrou-se, em humanos, interrupçao clínica e histológica do curso de CAN sem associaçao com mudança de regime imunossupressor e a despeito de alteraçoes pressóricas relacionadas ao bloqueio de AT1R. Dado o tamanho da amostra os dados requerem confirmaçoes.
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